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　　KEY WORDS: lung cancer; phosphatase and tensin homologue deleted from chromosome 10 gene(PTEN); immunohistochemistry

　　所有标本均取自西安交通大学医学院第二隶属医院病理科2001年至2004年间石蜡包埋标本，56例经病理学查抄证实为原发性肺癌。个中男性39例，女性17例；年数36-75岁，平均55岁。所有患者术前均未接管化疗、放疗及免疫治疗。按照WHO(1981)肺癌的分类尺度举办组织学分类，按照肿瘤的分级尺度(组织布局、异型性等)举办病理分级。个中鳞癌23例、腺癌20例、小细胞肺癌13例；病理分级为分化精采的17例、中平分化24例、分化不良15例。TNM分期按UICC(1997)尺度举办：Ⅰ期12例、Ⅱ期18例、Ⅲ期15例、Ⅳ期11例。肺门和(或)纵隔淋投合转移及远处转移(简称转移)：有转移19例、无转移37例。3例正常肺组织为比较，来自手术切除的癌旁正常肺组织(至少间隔癌肿5 cm以上)。
　　［3］熊敏，吴一龙. 现代肺癌病理与临床 ［M］. 北京：科学出书社, 2003:97-98.

　　关于PTEN基因与肺癌病理分级，临床分期的干系，海表里报道不多。Sano等［11］研究发明PTEN基因表达程度的坎坷与神经胶质瘤患者的病理分级相关，PTEN基因表达程度越低，说明肿瘤的恶性水平越高，临床分期越晚，预后也就越差。本尝试功效也显示分化不良的肺癌PTEN基因的卵白表达阳性率低于分化精采和中平分化者，且临床分期越晚，PTEN基因的卵白阳性表达率也越低，提示PTEN基因表达与肿瘤的恶性水平、临床分期密切相关，表达程度越低，临床分期越晚，肿瘤的恶性水平越高。
　　Ⅰ、Ⅱ期患者的PTEN卵白阳性表达率临近，差别无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ、Ⅳ期患者的PTEN卵白表达阳性率明明低落，与Ⅰ、Ⅱ期对比差别有统计学意义(P<0.05)。提示跟着病变的希望，PTEN的表达率呈下降趋势。在19例有转移的患者中，PTEN表达阳性率为26.32%，明明低于无转移者，经统计学阐明，两者之间的差别具有统计学意义(P<0.05，表2)。表2 PTEN的卵白表达与肺癌临床分期及转移的干系（略）
　　2.1 PTEN卵白在肺癌组织中的定位
　　［5］Kohno T, Takahashi M, Manda R, et al. Inactivation of the PTEN/MMAC1/TEP1 gene in human lung cancers ［J］. Genes Chromosomes Cancer, 1998, 22(2):152-156.
　　PTEN在56例肺癌患者中的表达阳性率为37.50%，个中PTEN表达阳性的患者平均年数为(53.35±8.70)岁，表达阴性的患者平均年数为(54.90±9.25)岁，两者对比无统计学差别(P>0.05)；39例男性患者中PTEN阳性表达率为41.03%，17例女患者中为29.14%，两者对比亦无统计学意义(P>0.05)。
　　1.4 统计学阐明
　　本研究功效显示，肺癌组织中PTEN基因的卵白表达主要漫衍于癌细胞质，核膜上也有着色，并且正常肺组织较肺癌组织着色明明加强。这与Hager等［6］对肾细胞癌的相关研究相似。尽量差异年数、性别患者的PTEN基因的卵白表达差异，但差别甚微，提示PTEN基因的表达与患者的年数、性别无关。尝试中，肺癌组织PTEN基因的卵白表达阳性率为50%，正常肺组织PTEN基因的卵白表达阳性率为93.27%，肺癌组织PTEN基因的卵白表达显著低于正常肺组织，认为原发性支气管肺癌中PTEN基因的卵白表达下调，提示PTEN基因的卵白表达缺失在肺癌的产生中大概起重要浸染。但Hosoya等［7］报道PTEN基因的突变率只有13.30%，远远低于本尝试检测到的PTEN基因的卵白表达缺失率(由阳性率计较)50%。其原因大概是：①影响PTEN基因的卵白表达的因素许多，如PTEN基因的纯和性丢失或突变、PTEN基因的杂合性丢失、PTEN基因启动子的甲基化、非翻译区的微小病变等均可导致该基因的低表达或不表达；②在PTEN基因复制、转录、翻译以及翻译后修饰的程度也可产生PTEN基因的低表达或不表达。
　　2.5 PTEN卵白表达与肺癌临床分期及转移的干系
　　［10］张蕾，刘彤华，刘鸿瑞，等. PTEN/MMAC1/TEP1在肺癌中的丢失和失活 ［J］. 中华病型学杂志, 2000, 29(2):85-88.
　　ABSTRACT: Objective To study the protein expression level and clinicalsignificance of the tumor suppressor gene PTEN in primary lung cancer. Methods We detected the protein expression of PTEN gene in paraffin specimens of 56 cases of lung cancer and 3 specimens of normal lung tissues by SPimmunohistochemistry. Results ① The positive rate of PTEN protein expression was higher in normal lung tissues than in lung cancer specimens, while it was lower in SCLC than in NSCLC. ② The positive rate of expression of PTEN protein became lower as the differentiation level decreased in the 56 cases of lung cancer specimens. ③ The positive rate of expression of PTEN protein was higher in patients with lung cancer of stage Ⅰ and Ⅱ than that in stage Ⅲ and Ⅳ. ④ The positive rate of expression of PTEN protein was 26.32% in 19 cases of transfused specimens, which was obviously lower than that in non-transfused specimens. Conclusion The expression of PTEN gene is related to classification criteria of lung cancer, malignancy degree, clinical stage and lymph node transfusion.
　　［1］Steck PA, Pershouse MA, Jasser SA, et al. Identification of a candidate tumor suppressor gene MMAC1 at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancers ［J］. Nat Genet, 1997, 15(4):356-358.
　　2 功效
　　在56例肺癌患者中，跟着分化水平的低落，PTEN的卵白表达阳性率也随之下降，分化精采者较中平分化者PTEN表达阳性率为高，但差别无统计学意义(P>0.05)；而分化不良者与前两者对比PTEN卵白阳性表达率明明低落，且差别有统计学意义(P<0.05，表1)。表1 PTEN卵白表达与肺癌分化水平的干系（略）
　　PTEN基因的卵白在肺癌组织中的表达较正常肺组织中的表达有所低落，说明PTEN基因的低表达大概在肺癌的产生成长进程中起重要浸染。该基因的表达与肺癌患者的年数、性别无关，而与肺癌的病理范例、组织的分化水平、临床分期、以及有无淋投合转移密切相关，表白PTEN基因大概作为判定肺癌病情严重水平及预后的指标，也可作为基因治疗的靶基因。这为此后肺癌的诊断及治疗提供新的思路。
　　［4］Kimura T, Suzuki A, Fujita Y, et al. Conditional loss of PTEN leads to testicular teratoma and enhances embryonic germ cell production ［J］. Development, 2003, 130(8):1691-1700.
　　今朝的一些研究功效提示，PTEN基因的变异与肺癌的差异病理范例有关［8-9］。Zhang等［10］研究显示，PTEN在小细胞肺癌中的缺失率达44%，高于非小细胞肺癌(24%)，提示PTEN的缺失在肺癌，尤其是小细胞肺癌的产生成长中起必然浸染。本研究显示PTEN基因卵白表达在非小细胞肺癌中的阳性率明明高于小细胞肺癌中的表达阳性率(鳞癌60.87%、腺癌55.00%、小细胞癌23.08%)，说明PTEN基因的表达与肿瘤的组织范例密切相关，尤其在小细胞肺癌中大概发挥重要浸染。
　　回收免疫组化SP法。鼠抗人PTEN单克隆抗体及SP试剂盒均购于北京中山生物公司。标本经甲醛溶液牢靠，石蜡包埋，持续切片3张，厚5 μm，通例苏木素-伊红(HE)染色复查诊断。免疫组化检测步调：一抗稀释浓度1∶50，通例脱蜡后微波炉抗原修复，4 ℃留宿，PBS洗；二抗37 ℃ 30 min，PBS洗；加链霉素抗生物素卵白-过氧化物酶溶液，37 ℃ 30 min，PBS洗；DAB显色，苏木素复染。用已知阳性切片作阳性比较，PBS取代一抗作阴性比较。


　　［2］Fromowitz FB, Voila MV, Chao S, et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer ［J］. Hum Pathol, 1987, 18(12):1268-1275.
　　1.3 功效鉴定
3 接头
　　［9］Lim WT, Zhang WH, Miller CR, et al. PTEN and phosphorylated AKT expression and prognosis in early- and late-stage non-small cell lung cancer ［J］. Oncol Rep, 2007, 17(4):853-857.

【摘要】 目标 研究抑癌基因PTEN在原发性肺癌中的卵白表达及其临床意义。要领 应用免疫组织化学SP法检测56例手术切除的肺癌石蜡标本及3例正常肺组织中的PTEN基因的卵白表达环境。功效 ①正常肺组织中PTEN卵白表达的阳性率明明高于肺癌患者，而在小细胞肺癌中的阳性表达低于非小细胞肺癌；②在56例肺癌患者中，跟着分化水平的低落，PTEN的卵白阳性表达率也随之下降；③Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者的PTEN卵白阳性表达率高于Ⅲ、Ⅳ期患者；④在19例有转移的肺癌患者中，PTEN表达阳性率明明低于无转移的患者。结论 PTEN基因的表达与肺癌的病理范例、组织的分化水平、临床分期以及有无淋投合转移密切相关。
　　1.1 质料
　　阳性染色主要位于癌细胞质(膜)，癌细胞核也有部门表达；阳性产品呈棕黄色弥漫漫衍(图1)。
　　2.2 PTEN卵白表达与肺癌一般临床特征的干系
　　肿瘤的产生是多阶段、多步和谐多基因改变的进程，肿瘤的恶性表型是多种因素彼此浸染导致正常细胞恶变的功效，而癌基因的激活和抑癌基因的失活在肿瘤的产生成长中起重要浸染。对抑癌基因的研究不只在摸索肿瘤产生的分子生物学机制方面有重要意义，并且在肿瘤的防范、治疗、诱导分化、凋亡、衰老等方面也有重大代价。PTEN基因(phosphatase and tensin homologue deleted from chromosome 10 gene)又称MMAC1(mutated in multiple advanced cancers gene)或TEP1(TGF-regulated and epithelial phosphatase 1 gene)，是1997年由Steck等［1］3个研究小组别离发明并定名的一种新的抑癌基因(简称PTEN)。现已证实该基因的突变、失活与多种肿瘤的产生成长密切相关。为探讨原发性支气管肺癌中PTEN基因的卵白表达与肺癌产生成长的干系，我们用免疫组织化学要领对56例肺癌患者石蜡标本及3例正常肺组织标本举办了研究。
　　应用SPSS12.0统计软件举办统计阐明，数据以均值±尺度差(x±s)暗示，计数资料组间的较量均回收卡方检讨，P<0.05认为差别具有统计学意义。

　　2.3 PTEN卵白表达与肺癌病理范例的干系
【参考文献】
　　［7］Hosoya Y, Gemma A, Seike M, et al. Alteration of the PTEN/MMAC1 gene locus in primary lung cancer with distant metastasis ［J］. Lung Cancer, 1999, 25(2):87-93.
　　1 质料与要领
　　PTEN是一种多成果的磷酸酯酶，主要有以下成果［3］：①参加胚胎的正常发育［4］； ②通过G1期阻滞或诱导细胞凋亡机制，抑制细胞发展；③抑制端粒酶的活性；④抑制细胞的迁移、铺展和局部黏附。很多研究显示，PTEN基因的缺失、突变或表达产品的失活，影响肺癌的产生、成长。Kohno等［5］检测了40株肺癌细胞系，发明15株小细胞肺癌中6株产生了PTEN DNA纯合性丢失，25株非小细胞肺癌中2株产生了PTEN DNA纯合性丢失，2株有无活性突变和错义突变，小细胞肺癌的PTEN失表达率好像高于非小细胞肺癌，说明PTEN在肺癌的产生、成长中作为一个抑癌基因发挥浸染。且有研究显示，PTEN卵白表达程度的坎坷与患者的病理分级及预后有关，患者预后越差，恶性度越高，PTEN卵白程度越低。提示PTEN大概参加了肺癌的产生、成长及浸润和转移。
　　Salvesen等［12］报道子宫内膜癌PTEN启动子甲基化患者很容易产生淋投合转移。本尝试也显示有淋投合转移的肺癌患者PTEN基因的卵白表达明明低于无淋投合转移者，提示PTEN基因的低表达与淋投合转移有关，表达阳性率越低，越容易产生淋投合转移。这大概是因为PTEN基因低表达的肺癌患者失去了PTEN对FAK介导的细胞浸润、转移和发展的抑制浸染，从而产生淋投合转移。
　　56例肺癌患者PTEN卵白表达的阳性率为50.00%，个中23例鳞癌中的阳性率为60.87%，20例腺癌中的阳性率为55.00%，两者较量无统计学意义(P>0.05)；13例小细胞癌中的阳性表达率为23.08%，其PTEN阳性率明明低于前两者，且具有显著性差别(P<0.05)。说明PTEN在小细胞肺癌中的阳性表达低于非小细胞肺癌，提示PTEN的卵白表达与肺癌的病理范例有关。
　　2.4 PTEN卵白表达与肺癌分化水平的干系
　　1.2 要领
　　［12］Salvesen HB, MacDonald N, Ryan A, et al. PTEN methylation is associated with advanced stage and microsatellite instability in endometrial carcinoma ［J］. Int J Cancer, 2001, 91(1):22-26.

　　参照Fromowitz等的要领［2］。首先按染色强度评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色；再按阳性细胞所占的百分比评分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为11%-50%，3分为51%-75%，4分为＞75%。染色强度与阳性细胞百分比的分值乘积>3分为免疫组化回响阳性。
　　［6］Hager M, Haufe H, Kemmerling R, et al. PTEN expression in renal cell carcinoma and oncocytoma and prognosis ［J］. Pathology, 2007, 39(5):482-485.
　　［8］Marsit CJ, Zheng S, Aldape K, et al. PTEN expression in non-small-cell lung cancer: evaluating its relation to tumor characteristics, allelic loss, and epigenetic alteration ［J］. Hum Pathol, 2005, 36(7):768-776.
【要害词】 肺癌；PTEN基因；免疫组织化学
　　 作者：李雅莉，辛丽红，杨侠，张洁，李家芝，刘云
　　［11］Soria JC, Lee HY, Lee JI, et al. Lack of PTEN expression in non-small cell lung cancer could be related to promoter methylation ［J］. Clin Cancer Res, 2002, 8(5):1178-1184.