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芍药芽总RNA提论文毕业取要领的研究

毕业论文库:农业工程 时间:2017-01-12 点击:

  1.1质料、试剂与仪器
  提取RNA所用的枪头、枪头盒、离心管均需用0.1%的DEPC水浸泡留宿,之后121℃灭菌30 min,80℃烘干备用;研钵、钥匙、量筒等玻璃器皿需180℃灭菌10 h以上,需提供专用的电泳槽、梳子等。
     芍药花大色艳,花型富厚,自古以来深受我国人民喜爱,是我国的传统名花。近几年来,关于芍药的研究报道逐渐增多,内容主要涉及植物生理和组织造就等方面,分子生物学方面的研究报道较少。RNA是生物体重要的遗传物质,RNA的提取是分子生物学的基本试验,RT-PCR、荧光定量PCR、cDNA文库构建、Northern杂交等都需要质量好、完整性高的RNA1。从芍药芽中提取高质量的总RNA是开展各项后续分子生物学试验的前提和基本,是研究基因表达的重要环节。可是芍药芽中富含多糖、多酚及某些无法确定的次生代谢产品,给其疏散纯化带来许多坚苦2。
  1质料与要领
  1.1.1质料芍药(Paeonia lactiflora Pall.)品种‘豪繁华’取自山东农业大学南校区试验地。取‘豪繁华’的休眠芽及休眠清除芽,去掉芽鳞,保存内芽,液氮速冻,-80℃冷藏备用。
  植物RNA提取的要领许多,有CTAB法、改善CTAB法、改善SDS法、Trizol法及一些在此基本上延伸出的植物RNA提取试剂盒等。到今朝为止,关于芍药芽总RNA提取的详细要领尚未见报道,且差异植物的差异组织,甚至同一种植物的差异组织,其RNA提取的详细要领也大概差异,因此有须要筛选抱负的芍药芽总RNA提取要领。本试验回收改善CTAB法、Trizol法和EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒三种要领提取芍药芽的总RNA,以期筛选出最适合的要领,为后续的分子生物学研究奠基基本。
  1.1.2试剂Trizol购自北京鼎国兴盛生物技能有限责任公司;EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒购自北京艾德莱生物科技有限公司;cDNA反转录试剂盒购自北京全式金生物技能有限公司;Taq酶购自宝生物工程有限公司;DEPC (焦碳酸二乙酯)、CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)、β-巯基乙醇、PVP(K-30) (聚乙烯吡咯烷酮)、SDS(十二烷基硫酸钠)、Tris碱、EDTA(乙二胺四乙酸钠)、琼脂糖、氯仿、异丙醇、异戊醇、无水乙醇、LiCl和NaCl均为入口或国产阐明纯。内参引物由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。
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