论文写作网

　　　　线虫在自然界漫衍遍及，种类繁多，危害多种动物和植物。植物寄生线虫是植物侵染性病症主要病原之一，遍及寄生在各类植物的根、茎、叶、花、芽和种子上，一种植物可以有一种可能多种寄生线虫，使植物产生各类病变，严重阻碍了农林业的成长[1]。植物寄生线虫的种类已达100多属2 000多种[2-3]，农林业出产上的主要线虫约1 100种[4]。植物寄生线虫对农业出产的危害很大，个中危害主要农作物的寄生线虫约500多种，其危害水平高出了细菌和病毒，仅次于真菌病害[5-7]。严重危害我国农业、林业、经济作物的植物寄生线虫已达100多种，有些植物寄生线虫对作物的直接危害甚至比其他病、虫、草害都严重，一般只要作物上产生植物寄生线虫引起的病变，就可以使该作物减产10%～40%，在严重的环境下，可以减产70%～80%，最为严重的就是造成绝收[8-9]。
　　（3）大豆孢囊线虫二龄幼虫（J2）的制备。参照文献[18]中孢囊线虫J2制备要领。将大豆种植在温室的病原泥土中，孢囊成熟后挖出根系和根系周围泥土，用过筛法疏散孢囊，选取新鲜丰满成熟的褐色孢囊放在廉价孵化池顶用0.5%次氯酸钠溶液消毒3 min，再用无菌水冲洗3遍，插手廉价孵化池中，在25 ℃，4 mmol·L-1ZnCl2溶液中孵化。4 d阁下会孵化出大量的J2，收集至灭菌的三角瓶中，置于4 ℃冰箱备用。
　　1.2.2 供试线虫的制备 （1）松材线虫二龄幼虫（J2）的制备。参照文献[18]中松材线虫J2制备要领。在无菌操纵条件下，将灰葡萄孢霉（Batrytiscinerea）接种于察氏造就基上，21 ℃下避光造就7 d，待菌丝长满造就皿后，将松材线虫接种于该菌丝长举办造就繁殖，26 ℃下避光造就5～7 d。通过贝尔曼（Baermann）漏斗法收集松材线虫，无菌水离心洗涤3次，2 000 r·min-1离心3次，每次3 min。用无菌水将离心获得的松材线虫稀释为1 000头·mL-1的悬液备用。
　　在线虫的生物防治中，抗生素的应用是较为有效的防治途径之一。海洋占地外貌积的71%，海洋中生态情况较陆地巨大多变，所以海洋放线菌会通过一些非凡的代谢途径来维持其生命勾当。近十几年来，已经从海洋微生物及其代谢产品中发明白很多布局新颖、活性奇特的活性物质，具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、杀虫等活性。今朝有许多操作海洋真菌代谢产品杀线的报道，可是杀线种类较单一[14]。海洋放线菌主要漫衍在海底沉积物、海洋生物外貌以及海水中，天津地处渤海湾，拥有富厚的海洋资源，因此，从中筛选到有杀线活性的菌株是有很大几率的[15-17]。
　　1 质料和要领
　　1.2 试验要领
　　1.2.1 活性菌株BH3A8发酵液的制备 第1步，海洋放线菌菌株BH3A8的种子造就。挑取纯化菌株至种子造就液中，28 ℃，200 r·min-1，震荡造就3 d。第2步，海洋放线菌菌株BH3A8的发酵造就。配制发酵造就基，将种子液按1∶10比例转接至发酵造就液中，28 ℃，200 r·min-1，震荡造就7 d。将发酵液用甲醇萃取后旋转蒸发浓缩成8倍液后，放入-10 ℃冰箱生存。
　　海洋放线菌BH3A8是本课题组从渤海差异深度海水样品中筛选出的具有杀线活性的生防菌株。本试验着重对其杀线虫谱、温室防效以及对松材线虫形态与举动频率的影响的劈头机理举办研究。
　　供试菌株海洋放线菌BH3A8菌株是天津市农业资源与情况研究所微生物研究室筛选收藏的菌种。
　　（2）南边根结线虫二龄幼虫（J2）的制备。参照文献[18]中根结线虫J2制备要领。取温室里接种南边根结线虫60 d后的番茄的根，将根剪成1～2 cm的小段；把根放于200 mL 1%的次氯酸钠溶液中，在豆乳机中搅拌剪切1～4 min；将悬浮液快速经孔直径0.15 mm，0.05 mm和0.03 mm的网筛，上下震荡网筛，在0.03 mm的网筛上即可收集到游离的卵；随即快速用无菌水冲洗0.03 mm的筛网上的的卵，以撤除残留的次氯酸钠；再次冲洗震荡根段以获取更多的卵，用过筛法收集到离心管中，在底部插手40%蔗糖溶液20 mL梯度离心，3 500 r·min-1，5 min，吸取界面溶液过0.03 mm筛，用水冲洗筛子去除蔗糖，反向将卵突入三角瓶中。将卵置于廉价孵化器中，加无菌水安排在25～28 ℃情况条件下孵化；4 d阁下会孵出大量的J2，收集到灭菌三角瓶中，置于4 ℃冰箱中备用[19]。
　　植物寄生线虫的非生物防治要领主要包罗农业技能设施防治、抗性育种、物理防治和化学防治等4类。植物寄生线虫今朝照旧主要采纳化学杀线虫剂举办线虫防治[10]，化学防治固然结果好，可是个中大部门药剂对人畜有剧毒、用量高、耗费大、严重污染情况和地下水源，粉碎生态均衡，并且农药的残留污染直接影响农产物深加工的质量和品质，与此同时，化学农药在杀灭植物病原线虫的同时，也杀伤了天敌及其他有益生物，影响了生物多样性，粉碎了生态均衡，化学杀线剂的应用正慢慢受到限制[11-13]。所以生物防治成为研究热点。
　　1.1 材 料