银杏(Ginkgo biloba L.)原产我国,系侏罗纪的孑遗植物,别名“活化石”。银杏的叶、果、树皮均有一定的药理作用,其中叶的药用价值最高。银杏叶提取物主要含有黄酮类和银杏内酯类,银杏黄酮在提取物中的含量较高其中所含有的黄酮能够增加脑血管流量,改善脑血管循环功能,保护脑细胞,扩张冠状动脉,防止心绞痛及心肌梗塞,防止血栓形成,提高机体免疫能力。对冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压病人均十分有益。以银杏叶提取物为主要成分多种制剂已广泛应用于临床[1]。因此银杏叶黄酮的安全、优化的提取具有实际应用意义。
提取制备方法较常见的有煎煮法、溶剂萃取法和CO2超临界流体萃取法等。煎煮法直接加热容易破坏黄酮结构,溶剂萃取法耗费大量溶剂,对环境污染较高,CO2超临界流体萃取法对设备要求较高[2-3]。本研究主要以黄酮含量作为指标,利用正交设计考察微波法提取的最佳工艺条件[4],并对初提物进一步通过大孔树脂分离纯化,考察其最佳纯化条件[5-6]。
1 实验材料、试剂及仪器
1.1 材料与试剂
银杏叶,D101型大孔树脂、AB-8 型大孔树脂、HPD400型大孔树脂。
芦丁标准品(批号:100080-200306中国药品生物制品鉴定所),5%亚硝酸钠、1%氢氧化铝、4%氢氧化钠、50%乙醇溶液、60%乙醇溶液、70%乙醇溶液、80%乙醇溶液。
1.2 仪器和设备
DG 120型四两装中药材粉碎机(浙江省瑞安市春海药材器械厂)、M700型微波炉(广东美的微波炉制造有限公司)、GL-21M型高速冷冻离心机(长沙湘麓仪器有限公司)、YP202N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)、722型紫外可见分光光度计(上海光谱仪有限公司)。
2 实验方法
2.1 芦丁的标准曲线
精密称取一定量的芦丁标准品,加60%乙醇制成0.2 mg/mL标准品溶液。准确吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL芦丁标准溶液,放入已标好号的1~6号10 mL容量瓶内,分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 mL的60%乙醇溶液;再加入5%亚硝酸钠溶液0.5 ml摇匀,放置6 min;加入10%硝酸铝溶液0.5 mL,放置6 min后;加入4%氢氧化钠溶液4.0 mL,加60%乙醇定容,摇匀后,放置15 min;在510 nm处测定吸光度。用1号容量瓶作为空白,用芦丁浓度作为横坐标、吸光度作为纵坐标绘制标准曲线。